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两种抗凝剂对献血者四项酶联免疫检测结果的影响

时间:2021-10-24 09:17:08  阅读:  

【摘 要】目的:探讨常用的两种抗凝剂(乙二胺四乙酸钠,肝素钠)对血站四项酶联免疫指标(HBsAg, 抗-HCV,TP抗体,HIV抗体检测)采用酶免疫吸附试验(ELISA)时对于检测结果的干扰。方法:随机采集街头无偿献血人群血液标本119份,分别采用EDTA-Na2,肝素钠进行抗凝,然后与其相对应的的非抗凝血(取血清)离心后按照所采用的各试剂盒说明要求进行平行检测。结果:EDTA-Na2和肝素钠抗凝的两组标本在检测 HBsAg时得出S/CO值与血清相比的均有显著性差异(P<0.01);在检测抗-HCV时,EDTA-Na2抗凝的标本S/CO值与血清相比较,两者差异无统计学意义(P>0.05),而肝素钠与其相比,两者之间有显著性差异(P<0.01);在检测TP抗体时,EDTA-Na2和肝素钠的抗凝标本所得的S/CO值与血清相比较,差异均无统计学意义(P>0.05);在检测抗-HIV及抗原时,EDTA-Na2抗凝的标本S/CO值与血清相比较,两者差异无统计学意义(P>0.05),而肝素钠与其相比两者之间有显著性差异(P<0.01)。结论:EDTA-Na2和肝素钠作为抗凝剂,会对血站四项酶联免疫检测结果产生影响。

【关键词】抗凝剂;EDTA-Na2;肝素钠;ELISA

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2014)03-01581-02

输血是医学史上一个非常重要的里程碑,但输血这柄双刃剑,一方面,对于危重的患者的救治起到了前所未有的积极作用,挽救了无数生命;而另一方面,它也带来了很多副作用。目前,按照《血站基本标准》及《血站管理办法》,血液采集后需做HBsAg、抗-HCV、HIV(1+2)抗体和(HIV-1p24)抗原、TP抗体 ELISA检测,各项目检测分别采用两个不同厂家试剂,不同的仪器及不同的工作人员进行检测。抗凝剂的性质不同,抗凝原理也不同,抗凝剂作为血液标本的一种添加剂,它的有无和种类不同都可能对检验结果都具有一定影响,研究如下:

1 资料与方法

1.1样本的留取和制备的方法

收集街头无偿献血者样本共 119份,取血辫末端血于EDTA-Na2、肝素钠抗凝管内,来回颠倒5-6次混匀。同时留取非抗凝血,接着将三种血液标本以3000r/min速度离心5min,分离出血浆和血清,而后将三种标本放置4℃过夜。

1.2 试剂与仪器

乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒、丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒、梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(上海科华生物技术有限公司),人类免疫缺陷病毒抗体(HIV1+2)及抗原(HIV-1p24)联合检测试剂盒(生物梅里埃中国有限公司),均有批批防伪标签并在有效期内。EDTA-Na2 抗凝管(山东永康公司,5ml),肝素钠抗凝管(浙江拱东医用塑料厂,5ml),均有批批防伪标签并在有效期内。离心机(型号:KOBOTA8420),STAR全自动加样器(型号:GienesiRSP200/8)和FAME全自动酶免处理系统(型号:MC-FAME24/30)。

1.3 检测方法 全部检测严格按照试剂盒说明书进行微机编程,先由STAR全自动加样器完成样品处理,然后由FAME按照设定的程序完成酶标板的孵育、洗板、加试剂、判读结果以及结果释放等处理过程。

1.4 统计学处理 单个项目的两种抗凝管结果分别与血清的检测结果相比较,由于本次实验数据属于非正态分布,所以笔者选用SPSS.v14.0软件的非参数检验方法进行统计。

2 结果

2.1 两种抗凝剂对HBsAg检测的影响

EDTA-Na2抗凝标本与血清两组比较有显著性差异(P < 0.01);肝素钠抗凝标本与血清两组比较有显著性差异(P < 0.01),结果见表1。

2.3两种抗凝剂对TP抗体检测的影响

EDTA-Na2抗凝标本与血清两组比较无差异(P > 0.05);肝素钠抗凝标本与血清两组比较无差异(P > 0.05),结果见表3。

3 讨论

本次采集的119份实验标本,全部来源于街头随机无偿献血者,献血者在献血前要经过健康咨询和HBsAg初筛,本次实验标本的HBsAg、抗-HCV、HIV(1+2)抗体和(HIV-1p24)抗原、TP抗体的检测结果均为阴性。经过统计学的计算,EDTA-Na2和肝素钠抗凝的血液标本与血清相比较差异有统计学意义,但未出现假阳性或假阴性结果。而对于临界值附近的弱反应标本可能出现假阳性或假阴性结果,影响较大。由以上四表可以看出,两组抗凝剂血液标本与血清的检测结果存在着显著差异,说明抗凝剂的种类不同会影响四项酶联免疫检测结果 。EDTA- Na2主要影响HBsAg的检测,肝素钠的主要影响HBsAg、抗-HCV及HIV(1+2)抗体、(HIV-1p24)抗原的检测。

从结果可以看出,采用EDTA-Na2抗凝的血液标本总体都要高于血清抗凝的血液标本。原因可能是抗凝剂中的乙二胺四乙酸钠与酶结合物Fe2+的络合的结果,而抗凝剂又与纤维蛋白中的Ca2+ 结合,导致结合的大分子(酶-Fe2+ -抗凝剂-Ca2+-纤维蛋白)与微板结合力增强,导致检测OD值升高[1],继而S/CO值也升高,可能使ELISA有正向干扰作用。而且采用抗凝剂的血液标本一定要抗凝完全,否则带有的纤维蛋白原的干扰会出现拖尾现象,使OD值升高,易出现假阳性,所以一定要充分离心尤其是采用肝素抗凝的血液标本[2]。

尽管目前使用的进口和国产试剂都已说明“本试剂适用于血清和血浆”,但提及都是肝素、EDTA、4%柠檬酸等样本抗凝剂对血液检测结果没有影响,而ACD、CPDA、CP2D和CPD等血液保养液做样本对试剂检测结果的影响是有差异的。由于各种检测试剂的性质差异也会对所用的抗凝剂有所选择,对所检测的结果也会产生影响,有些厂家在说明书已经明确列出哪种抗凝剂适合或不适合此种检测试剂,会对实验的结果产生很大的影响,有人做过实验,发现[3]EDTA抗凝剂对荷兰生物梅里埃有限公司生产的双抗原夹心法抗-HIV诊断试剂盒没有影响,所以此项目应选用这样的试剂。所以应该严格按照试剂盒说明书严格选择对抗凝剂有统一要求的试剂,同时在实际工作中应注意抗凝剂的影响。不同的检验项目对抗凝剂与血样的比例有不同的要求,不能随便增减,抗凝剂与血样不按实验规定操作,将对结果有影响。有文献[4]报导150例误差中,采血量与抗凝剂比例有误者144例,占95.3%。如果凝血试验APPT的测定,抗凝剂与血液的应该为比例1:9,如果将其改为1:7,其结果明显延长,可增加2.4秒[5]。

ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求。本试验采用的是 STAR全自动加样器和FAME全自动酶免处理系统,所以在技术条件上不会出现问题。原因可能是溶血时细胞内液中的各种活性酶及具有酶样活性的物质可与底物非特异性结合; Hb具有类过氧化物酶活性,其效应与辣根过氧化物酶(HRP)类似,溶血后反应孔非特异性吸附Hb,催化底物产生一定程度的显色,使本底OD值升高,继而S/CO值也升高。由此也更易出现假阳性。除此之外,文献报导[6]标本的一些内源性物质,诸如补体、异嗜性抗体、类风湿因子及血液成分(血脂过高,胆红素、血粘度过大);外源性物质,诸如溶血、细菌污染、标本保存不当等都会对ELISA产生干扰。

参考文献:

[1] 陈建国,陆建华,黄飞等。HBsAg携带者TSGF与其它肝病标志物检测的意义[J]。中国全科医学,2005,8(6):459

[2] 方晔。血清与血浆中的HBsAg在全自动酶免分析仪检测结果比较[J]。实用医技杂志,2004,11(3):309

[3] 杨丙辛,邢培清,方建华。抗凝剂对检测抗-HIV结果的影响[J]。职业与健康,2006,22(23):2072

[4] 周长华,王 玲.凝血四项分析前的质量控制.实用医学杂志,2003, 19(10):1 169~1 170

[5] 韩志芳.抗凝剂在实验中的合理选择和应用[M].医学理论与实践,2002,15(4):37

[6] 叶千红,张丽霞。关于标本因素对ELISA检测结果影响的分析[J]。中国实验诊断学,2003,7(5):440


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